蛋白表达纯化
重组蛋白表达技术服务
重组蛋白表达技术可用于多种下游应用，包括基因调控分析、蛋白结构及功能分析、蛋白质间相互作用分析等。对于特定的应用，使用正确的蛋白表达系统是实验成功的重要因素。在选择蛋白表达系统时，所需考虑的最重要因素是生物活性、溶解性、速度及得率等。艾诺迪生物可提供基于原核、酵母、昆虫杆状病毒、哺乳动物细胞、无细胞蛋白表达体系等多种蛋白表达系统的毫克至百克级高纯度蛋白定制服务。
四种蛋白表达系统的优缺点
| 蛋白表达系统 | 优点 | 缺点 |
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| 原核表达系统 |
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| 酵母表达系统 |
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| 昆虫杆状病毒表达系统 |
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| 哺乳动物细胞表达系统 瞬时表达 |
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| 哺乳动物细胞表达系统 稳定表达 |
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抗体制备服务
抗体定制服务 · 单克隆抗体制备、多克隆抗体制备、抗体配对
凭借在抗体生产领域多年的工作经验，艾诺迪生物提供高质量的抗体生产服务，涵盖从抗原制备到抗体生产的每一步。除此之外，还提供抗体标记、抗体亚型鉴定、杂交瘤测序、抗体亲和力测定等下游服务。
为什么选择我们
如何选择抗体
一般来说，单克隆抗体是诊断制造和治疗药物开发的理想选择，尤其是针对单个抗原表位需要大量相同抗体的应用。而对于一般性的研究应用，多克隆抗体比单克隆抗体具有特定的优势。
| 单克隆抗体 | 多克隆抗体 | |
|---|---|---|
| 优点 |
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| 缺点 |
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| 应用 |
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免疫宿主的选择
最常见的宿主是小鼠和兔。小鼠通常用于产生单克隆抗体，免疫周期较短、成本较低，其抗体可用于早期发现研究、体内临床前治疗研究和体外诊断。与小鼠相比，兔具有较高的成功率和更广泛的抗原适应范围，可以识别更多种类的表位，亲和力和特异性更高。大鼠、山羊和鸡等宿主也各有优缺点。
试剂盒开发
ELISA 试剂盒开发
ELISA 试剂盒检测具有高效、快捷、易批量操作等优点。艾诺迪生物能够针对特定检测源，制备特异性抗原抗体，根据应用需要量身定制检测试剂盒，有效控制检测试剂成本。可采用夹心法、竞争法（测定抗原）、间接法（测定抗体）或竞争法（测定小分子化合物）定量检测目标物的含量。
服务内容
- 分析目标蛋白的基因和氨基酸序列，进行抗原性及表达分析、密码子优化，完成全基因合成
- 构建重组蛋白的原核表达载体，在 E. coli 体系中诱导表达并经镍柱亲和纯化，获得 1～3 mg 纯化重组蛋白，纯度 > 85%
- 如为小分子靶标，通过结构分析进行分子修饰并偶联载体蛋白，用于免疫及检测
- 夹心 ELISA 需要不同表位的抗体用做配对，建议同时进行多克隆抗体和单克隆抗体的制备
- 免疫 2 只新西兰兔和 5 只 BALB/c 鼠，ELISA 效价大于 10 万后进行抗血清收集及杂交瘤制备
- 筛选阳性克隆并亚克隆，进行表位、反应性及亲和力鉴定
- 多克隆抗血清经抗原亲和纯化获得特异性抗体 10–20 mg；单克隆抗体经蛋白 A 亲和纯化获得 3–5 mg
- 抗原或抗体标记，一般标记 HRP 或生物素
- 抗原抗体使用浓度优化；包被条件及反应条件优化
- 回收率测定，需达到 80%–120% 的回收范围
- 批间差及批内差测定，需小于 15%
- 37 ℃ 破坏性稳定性试验（3、7、10、14 天），同时 4 ℃ 留样
- 临床样品或真实样本检测，确定符合率
- 组装 5 份 ELISA 试剂盒，包括所有组分及说明书
细胞系构建
CRISPR 基因敲除 · 稳定细胞系构建 · 高表达稳定细胞株开发
艾诺迪生物提供 CRISPR/Cas9 基因敲除服务，能够准确地敲除指定的基因。与传统的 TALEN（转录激活子样效应物核酸酶）以及 ZNF（锌指核酸酶）技术相比，CRISPR 技术能够低成本地实现高效灵活的基因敲除。您只需提供目的基因序列和细胞，即可获得高性价比的基因敲除服务，并定期收到进度报告。
服务优势
- 高成功率，低脱靶率：多组 gRNA 设计和验证，提供脱靶分析和检测服务。
- 全程透明：定期汇报实验进度，实验全程透明化。
- 一站式服务：专注于基因和重组蛋白研究，提供从 gRNA 设计到蛋白质检测（可选）全过程的实验服务。
服务流程
| 步骤 | 项目评估 | Phase I：gRNA 载体构建 | Phase II：单克隆细胞株筛选 |
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| 流程 |
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| 周期 | — | 约 2 周 | 约 10–14 周 |
| 交付 | — | gRNA 序列 |
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客户须知
- 需提供目的基因序列或序列号；若非常见细胞，需提供对应的宿主细胞和培养流程。
- 免费提供目的基因测序鉴定，也可根据要求提供 Western blot、脱靶测序鉴定等其他检测服务（另外收费）。
蛋白-蛋白互作
GST pull-down 服务
GST 融合蛋白沉降技术（GST pull-down）利用 GST 对谷胱甘肽（GSH）偶联球珠的亲和性，将 GST 融合蛋白与谷胱甘肽偶联球珠结合，并从蛋白的混合液中纯化得到与 GST 融合蛋白相互作用的蛋白。该方法可以鉴定与已知蛋白相互作用的未知蛋白，也可鉴定两个已知蛋白间是否存在相互作用。
我们的优势
- 设置多组对照，充分排除干扰因素，结果判断更加精准
- 实验重复进行两次，排除随机因素影响，实验结果更加可靠
- 拥有完整的下游配套，可以利用 BLI 技术进行进一步定量分析
- 使用银染技术，灵敏度为考马斯亮蓝的 100 倍，SDS-PAGE 电泳结果更加清晰
- 可以提供从 GST 蛋白制备到蛋白互作检测的一站式服务
服务内容
| 服务内容 | 客户提供 | 周期 | 交付 |
|---|---|---|---|
| 分子间相互作用分析 GST pull-down |
| 约 2 周 | 相互作用分析报告（包含 SDS-PAGE 图、WB 结果等） |
如果客户提供序列，将负责 GST 融合蛋白或靶蛋白的制备，在交付互作分析报告的同时交付纯度 > 90% 的蛋白。